FRET analysis of Calmodulin Binding to Nitric Oxide Synthase Peptides and Enzymes
Notice bibliographique
Résumé
Calmodulin (CaM) is a ubiquitous Ca 2+ ‐sensor protein that binds and activates the Nitric Oxide Synthase (NOS) isozymes. Although the structure of CaM has been determined when bound to a peptide derived from the CaM‐binding domain of endothelial NOS, the conformation of CaM when bound to the three mammalian NOS holoenzymes has yet to be determined. Förster Resonance Energy Transfer (FRET) is a useful method for the determination of the distance between two different fluorescently labeled residues separated by ~10 to ~100 Å. The goal of our research is to determine the conformation of CaM when bound to all three NOS isoforms through the use of FRET. We have produced a double cysteine CaM mutant (T34C/T110C) using site‐directed mutagenesis for these FRET measurements. The NOS enzymes contain three cofactors (heme, FMN, and FAD) that absorb light strongly between 250 and 500 nm. In order to avoid undesired quenching, far‐red shifted fluorescent dyes (Alexa Fluor 546 C 5 ‐maleimide and DABMI) were chosen so that they can be selectively excited in the presence of the NOS cofactors. FRET studies were performed on the fluorescently labeled CaM with stoichiometric amounts of synthetic CaM‐binding domain NOS peptides and enzymes. These studies will provide a better understanding of the inherent differences between the Ca 2+ ‐dependent and Ca 2+ ‐independent binding of CaM to the mammalian NOS isozymes. This work is supported by NSERC.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».