High-Throughput Genotyping of Single Nucleotide Polymorphisms in the <i>Plasmodium falciparum dhfr</i> Gene by Asymmetric PCR and Melt-Curve Analysis
Notice bibliographique
Résumé
Mutations within the Plasmodium falciparum dihydrofolate reductase gene (Pfdhfr) contribute to resistance to antimalarials such as sulfadoxine-pyrimethamine (SP). Of particular importance are the single nucleotide polymorphisms (SNPs) within codons 51, 59, 108, and 164 in the Pfdhfr gene that are associated with SP treatment failure. Given that traditional genotyping methods are time-consuming and laborious, we developed an assay that provides the rapid, high-throughput analysis of parasite DNA isolated from clinical samples. This assay is based on asymmetric real-time PCR and melt-curve analysis (MCA) performed on the LightCycler platform. Unlabeled probes specific to each SNP are included in the reaction mixture and hybridize differentially to the mutant and wild-type sequences within the amplicon, generating distinct melting curves. Since the probe is present throughout PCR and MCA, the assay proceeds seamlessly with no further addition of reagents. This assay was validated for analytical sensitivity and specificity using plasmids, purified genomic DNA from reference strains, and parasite cultures. For all four SNPs, correct genotypes were identified with 100 copies of the template. The performance of the assay was evaluated with a blind panel of clinical isolates from travelers with low-level parasitemia. The concordance between our assay and DNA sequencing ranged from 84 to 100% depending on the SNP. We also directly compared our MCA assay to a published TaqMan real-time PCR assay and identified major issues with the specificity of the TaqMan probes. Our assay provides a number of technical improvements that facilitate the high-throughput screening of patient samples to identify SP-resistant malaria.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,004 | 0,002 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».