Isolation of the <i>topB</i> gene encoding DNA topoisomerase III as a multicopy suppressor of <i>topA</i> null mutations in <i>Escherichia coli</i>
Notice bibliographique
Résumé
One major function of DNA topoisomerase I in Escherichia coli is to repress R-loop formation during transcription elongation, which may otherwise inhibit cell growth. We have previously shown that the growth problems of topA mutants can be corrected by overproducing RNase H, an enzyme that degrades the RNA moiety of an R-loop. The goal of the present study was to identify other potential regulators of R-loop formation. To this end, we have screened for multicopy suppressors of topA null mutations. As expected using this procedure, we cloned the rnhA gene encoding RNase H. In addition, we also identified the topB gene encoding DNA topoisomerase III as an efficient suppressor of topA null mutations and, hence, of R-loop formation. We show that DNA topoisomerase III is able to relax transcription-induced negative supercoiling both in vitro and in vivo. An R-loop is also shown to be a hot-spot for relaxation by DNA topoisomerase III, and we found that R-loop-dependent hypernegative supercoiling can be prevented by the activity of this topoisomerase in vivo. It is also shown that the topB gene can act synergistically with the rnhA gene to correct the growth defect of topA null mutants efficiently. This synergistic effect can be explained by the fact that some R-loops must not be degraded in order for the RNA to be available for protein synthesis. Topoisomerase III can presumably repress the formation of such R-loops or cause their destabilization to prevent RNA degradation. This is supported by the fact that overproduction of this topoisomerase corrects the negative effect of overexpressing RNase H activity on the growth of topA null mutants at low temperatures. Moreover, the fact that DNA topoisomerase III does not relax global supercoiling supports our previous conclusion that R-loop formation, and therefore the essential function of DNA topoisomerase I, involves local, rather than global, supercoiling.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».