Macropinocytosis of APP is controlled by a cascade of regulatory proteins
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Background The internalization of the Amyloid Precursor Protein (APP) is recognized as an important step in beta‐amyloid (Aβ) production. We have discovered that macropinocytosis of cell surface APP leads to rapid transport directly to lysosomes, bypassing early and late endosomes. This process leads to APP cleavage to Aβ and is regulated in part by Arf6. Here, we hypothesize that the binding/cross‐linking of APP at the cell surface recruits Fe65 and results in the recruitment and activation of Arf6. Arf6 then activates downstream small GTPases that are known to regulate macropinocytosis in non‐neuronal cells (including Rac1, Cdc42 and RhoA) leading to APP internalization by macropinocytosis. Method Neuro2a neuronal cells are transfected with fluorescent‐tagged proteins including Fe65, Rac1, Cdc42 and RhoA. Membrane PI(4,5)P2, a marker for membrane ruffling and the initiation of macropinocytosis, is visualized using fluorescent‐tagged marker known as PLCdelta‐PH. Cells are cultured in 37°C confocal dishes on the stage of a Leica SP8 confocal microscope. Fluorescent‐labelled anti‐APP antibodies are added to bind/cross‐link APP at the plasma membrane. We then use confocal microscopy/live cell imaging to visualize the recruitment of the regulatory proteins in real time. Result Upon anti‐APP antibody binding, we can see APP recruited to sites on the plasma membrane enriched with PI(4,5)P2 and the plasma membrane begins to ruffle. We see Fe65 rapidly recruited to the membrane, along with active Arf6 at these sites of membrane ruffling. We also observe Rac1, Cdc42 and RhoA recruited to these regions. APP at these sites is then observed to rapidly internalize to lysosomes, demonstrated by its colocalization with the lysosomal marker LAMP1. Conclusion These results demonstrate the active recruitment of GTPase proteins known to regulate macropinocytosis to the membrane at sites of APP binding/cross‐linking. These regulators could be targeted to modulate APP trafficking and reduce the production of Aβ.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».