A novel protocol for protoplast isolation, transfection, and culture in Cannabis sativa L
Notice bibliographique
Résumé
Protoplasts are a valuable tool for studying gene expression and applying genome editing techniques. Given the high medicinal and industrial potential of Cannabis sativa L., developing an efficient protoplast-to-plant regeneration protocol is highly desirable. Due to its recalcitrant nature, a complete plant regeneration from cannabis protoplasts has not yet been achieved. This study details a robust protocol for cannabis protoplast isolation, purification, transient transfection, and culture, additionally reporting somatic embryo-like structures derived from protoplast-derived callus. We demonstrated that the age of donor material, the composition of the enzyme solution, and the duration of enzymolysis are crucial for efficient protoplast isolation. Protoplast embedding, coupled with a rich culture medium and plant growth regulators, proved critical for initiating cell wall re-synthesis, cell division, and microcallus formation. Protoplasts isolated using the reported protocol were abundant (2.2 × 10 6 protoplasts/1 g of fresh weight), viable (78.8% viability) and able to undergo cell wall re-synthesis (56.1% of viable cells), followed by cell divisions (15.8% plating efficiency). Polyethylene glycol-mediated transfection yielded a 28% transfection efficiency and 17% plating efficiency in 10-day cultures. Protoplast-derived microcalli successfully proliferated on six regeneration media containing various concentrations of 6-benzylaminopurine and thidiazuron, exhibiting further proliferation and greening within two months. This system provides a reliable protocol for isolation, transfection and culture of cannabis protoplasts. It also offers a framework for investigating gene function, as well as advancing protoplast fusion and genome editing technologies for this species.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,003 | 0,003 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».